摘要: 传统的平板分离培养法，不能全面反映垫料微生物的基因信息，所以获得高质量的垫料微生物总DNA对于研究垫料微生物的群落结构就显得尤为重要。本实验设计对比了6种关于养猪发酵床垫料微生物总DNA的提取方法，对6种方法提取的DNA的浓度和纯度进行比较评价，结果表明，试剂盒法中因为没有专门针对本实验垫料的总DNA提取试剂盒，所采用的粪便，土壤以及淤泥总DNA提取试剂盒都没有达到很好的效果；而在化学法当中，单纯的SDS法和CTAB法都不能有效除去腐殖酸和杂蛋白的污染，通过核酸蛋白分析仪测定的A260/A280的比值基本都在1.5以下，说明纯度很低，用16S rDNA通用引物进行PCR扩增也没有得到目的条带。在SDS-CTAB结合法中利用10％的PEG-8000进行沉淀不进行回收纯化所提取的DNA具有完整性好，纯度高的优点，浓度达到200 ng.μL-1以上，通过核酸蛋白分析仪测定的A260/A280的比值达到1.8左右。用16S rDNA通用引物扩增得到比较亮的目的条带，因此SDS-CTAB结合法是一种高效、可靠的垫料微生物总DNA提取方法，有利于进行下游的分子生态学研究。
关键词: 垫料微生物；DNA提取；SDS-CTAB；16S rDNA
